Sviluppà metudi affidabili è standardizati per testà a suscettibilità di i sciami di zanzare à l'insetticidi hè cruciale per capisce l'efficacità di novi ingredienti attivi o formulazioni. I metudi per testà a suscettibilità di i sciami di zanzare à l'insetticidi o prudutti di cuntattu (cum'è quelli prumossi in i prugrammi di salute publica) sò ben stabiliti è standardizati. Tuttavia, i metudi di test per l'insetticidi volatili o aerosol utilizati in i prudutti domestichi sò difficiuli da implementà efficacemente. Basatu annantu à e raccomandazioni di l'Organizazione Mondiale di a Salute per l'insetticidi domestichi, avemu sviluppatu un metudu standardizatu è à altu rendimentu per testà i prudutti aerosol utilizendu zanzare in gabbia è un metudu di disinfezione efficace realizatu in una camera di prova Peet-Grady (camera di prova PG). Avemu validatu l'efficacità di stu novu metudu utilizendu pupulazioni di zanzare Aedes è Anopheles resistenti à l'insetticidi è suscettibili. Una caratteristica nova di stu metudu hè l'inclusione di una camera diretta à e gabbie di zanzare, chì permette una valutazione quantitativa in tempu reale di i tassi di uccisione di zanzare dopu l'esposizione à l'insetticida. A disinfezione di tamponi rimuove efficacemente l'oliu aerosol chì cuntene piretroidi residui da a superficia di a camera di prova, cù tassi di mortalità inferiori à u 2% per e zanzare suscettibili testate direttamente nantu à a superficia di a camera. Nisuna eterogeneità spaziale in i tassi di uccisione o di mortalità trà e zanzare in gabbia hè stata osservata in a camera PG. U nostru metudu à doppia gabbia furnisce un rendimentu ottu volte più altu ch'è u metudu di volu liberu, chì permette testi simultanei di diverse ceppe di zanzare è una discriminazione efficace trà pupulazioni di zanzare suscettibili è resistenti testate in parallelu.
Finu à oghje, l'insetticidi aerosol sò stati aduprati principalmente in casa per a prutezzione persunale, cù un usu limitatu in i prugrammi di salute publica. Tuttavia, studii recenti anu dimustratu un usu diffusu di insetticidi domestichi in e zone induve e malatie trasmesse da vettori sò prevalenti. Ch'ella sia a motivazione per u repellente per e zanzare o a prevenzione di e malatie, ci hè un bisognu urgente di metudi standardizati è faciuli d'utilizà per u screening di e pupulazioni di zanzare endemiche per a suscettibilità à l'insetticidi domestichi. Questu hè cruciale per prevede l'efficacia di l'insetticidi contr'à i vettori lucali è capisce cumu l'usu di l'insetticidi domestichi influenza a selezzione evolutiva per a resistenza à l'insetticidi.
U Metudu Supplementariu 1 furnisce struzzioni dettagliate passu à passu per realizà u nostru prugramma di test di insetticidi aerosol.
Ancu s'è e linee guida di l'OMS ricumandanu l'usu di nebulizzatori automatizati, ùn furniscenu micca specificazioni tecniche specifiche. L'usu di nebulizzatori automatizati hè cruciale, postu chì a nebulizazione manuale in una camera di propilene glicole ùn hè micca solu assai laboriosa, ma pò ancu causà incongruenze spaziali è variazioni in a durata di a nebulizazione.
A camera di reazione deve esse sterilizzata dopu ogni prova, ma u metudu di pulizia interna raccomandatu in a Linea Guida di l'OMS implica l'applicazione d'acqua da una manguera. In u nostru travagliu cutidianu, questu metudu hè u passu u più laboriosu in l'usu di l'attrezzatura bioanalitica, dunque avemu sviluppatu è testatu una prucedura di sterilizazione basata nantu à u tampone.
E parti amovibili di u ventilatore sò trattate cum'è descrittu sopra, è e pale è u quadru di u ventilatore sò puliti cù una spugna imbevuta in una soluzione à 5% di Decon 90.
Basatu annantu à a relazione trà a durata di a spruzzatura è a velocità di erogazione di u pruduttu, u nostru dispensatore d'aerosol hà ancu dimustratu una bona precisione in u cuntrollu di u rapportu di dosaggio di l'aerosol, almenu in l'intervallu testatu da 1 à 4 volte. Cum'è mostratu in a Fig. 3b, sta caratteristica hè particularmente impurtante per caratterizà a relazione dose-risposta di e nuove formulazioni d'aerosol o determinà a dose d'identificazione per rilevà a resistenza à l'insetticidi.
Dimostremu chì u nostru protocolu rivisu per a valutazione di l'insetticidi aerosol domestichi, utilizendu a disinfezione cù tamponi, gabbie doppie, spruzzatori cuntrullati à distanza è registrazione biometrica da camere d'azione, hè un'alternativa più efficace è fattibile à l'attualeWHOraccomandazioni. U metudu di disinfezione cù tamponi, chì richiede solu 20 minuti, risparmia significativamente tempu paragunatu à u protocolu esistente (chì richiede tipicamente un'ora per camera di prova). Riduce ancu u tempu chì l'operatori passanu à mette l'equipaggiu di prutezzione individuale cumpletu (per esempiu, caschi respiratori è vestiti di travagliu antistatici). Inoltre, questu metudu genera menu liquidu è vestiti contaminati per u trattamentu chè una pulizia cumpleta di a camera di prova, minimizendu cusì u putenziale di contaminazione di a stanza chì ospita a camera di prova. U metudu di disinfezione cù tamponi hè ancu adattatu per a disinfezione di sale di prova semipermanenti chì richiedenuminimupiazzamentu di mobili in diverse disposizioni di stanza.
Una questione chjave esplorata in questu studiu è in altri hè a standardizazione di e dosi d'esposizione à l'insetticidi applicati in l'ambiente in diversi protokolli di prova. Cum'è mostratu in a Figura 2b, malgradu una durata fissa di spruzzatura, u vulume di spruzzatura variava secondu i tipi di lattine d'aerosol, riflettendu potenzialmente differenze in i prucessi di fabricazione (per esempiu, pressione interna, usu di propellente, struttura di l'ugellu, ecc.). Inoltre, l'attuale mancanza di dispositivi di spruzzatura remota dispunibili in u cummerciu cù a flessibilità necessaria in a durata di spruzzatura limita u so usu in a valutazione di a relazione dose-risposta per u cuntrollu di e zanzare. A spruzzatura manuale attraversu porte di prova o porte d'accessu (se dispunibili) pò purtà à variazioni in e dosi d'esposizione. In fatti, i nostri risultati evidenzianu a necessità è l'impurtanza di riduce queste fonti di variazione. Per e pupulazioni resistenti di Aedes aegypti, avemu osservatu una currelazione trà a dose d'aerosol è a determinazione finale di suscettibilità o resistenza (Figura 3b). Idealmente, e dosi d'aerosol devenu esse standardizate in grammi di sustanza aerosolizzata piuttostu chè in durata di l'aerosolizazione per facilità i paragoni trà diversi studii.
RCAD offre un approcciu alternativu per a ricerca futura chì minimizza l'impattu di e variazioni di prucessu. Ancu s'è avemu trovu chì a standardizazione di i spray aerosol ùn hè micca fattibile, avemu dimustratu chì a massa di aerosol furnita attraversu diverse lattine aerosol pò esse stimata in modu riproducibile calibrendu a lunghezza di u spray (Figure 2b, 3a). Tale standardizazione di a cuncentrazione di aerosol in ogni camera di prova hè cruciale per migliurà a riproducibilità di i risultati.
Basatu annantu à a nostra sperienza è quella d'altri gruppi di ricerca, e raccomandazioni cuntenute in l'attuale Linea Guida riguardu l'usu di i metudi di rilevazione di l'aerosol per testà e zanzare in volu liberu ponenu sfide logistiche significative per i studii di laburatoriu è semi-campu. Per esempiu, i metudi di rilevazione di e zanzare in volu liberu anu un rendimentu assai bassu (cumprese a ricattura di e zanzare in volu liberu sopravviventi, chì richiede assai travagliu) è soffrenu di una quantità di limitazioni tecniche, cum'è e difficultà à determinà i tassi di uccisione in tempu reale.
Ancu s'è u nostru esperimentu validatu à doppia gabbia affronta u prublema di e limitazioni di u flussu è hè un metudu fattibile per u screening di a suscettibilità di e zanzare à l'insetticidi aerosol, si deve nutà chì i tassi di mortalità di e zanzare di l'Isule Cayman eranu significativamente più bassi in l'esperimentu di a gabbia chè in l'esperimentu di volu liberu (Fig. 5c, Tavula 1). Questa differenza pò riflette una riduzione di a dosa di insetticida in l'internu di a gabbia, postu chì menu goccioline di aerosol penetranu in a maglia è entranu in a gabbia. Studi futuri puderanu aduprà tessuti à maglia più grande è disinni di gabbia cù tassi di flussu d'aria di ventilatore più elevati (per esempiu, disinni cilindrici) per validà ulteriormente i risultati ottenuti cù i diversi metudi sperimentali.
Data di publicazione: 02-02-2026