Materiali vegetali è patogeni
Una pupulazione di mappa di l'associazione di sorgu cunnisciuta cum'è a pupulazione di cunversione di sorgu (SCP) hè stata furnita da u duttore Pat Brown à l'Università di l'Illinois (ora in UC Davis).Hè stata descritta prima è hè una cullizzioni di diverse linee cunvertite à photoperiod-insensibilità è statura più chjuca per facilità a crescita è u sviluppu di e piante in ambienti americani.510 linii di sta pupulazione sò stati utilizati in stu studiu, ancu s'è per via di mala germinazione è altri prublemi di cuntrollu di qualità, micca tutti i linii sò stati usati in l'analisi di tutti i trè caratteristiche.In ultimamente, i dati da 345 linee sò stati utilizati per l'analisi di a risposta di chitina, 472 linee per a risposta flg22, è 456 per a resistenza TLS.B. cookeistrain LSLP18 hè stata ottenuta da u duttore Burt Bluhm à l'Università di Arkansas.
Misurazione di a risposta MAMP
Dui MAMP diffirenti sò stati usati in stu studiu flg22, (catalogo Genscript # RP19986), è chitina.I pianti di sorghu sò stati cultivati in inserti posti nantu à i piani pieni di terra (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) in a serra.I pianti sò stati regati u ghjornu prima di a cullezzione di mostra per evità l'umidità extra di foglia in u ghjornu di cullizzioni.
I linii sò stati randomizzati è, per ragioni logistiche, sò stati piantati in lotte di 60 linee.Per ogni linea, trè "pote" sò stati piantati cù dui sementi per linea.I lochi successivi sò stati piantati appena u batch precedente hè statu processatu finu à chì a pupulazione sana hè stata evaluata.Dui corsi sperimentali sò stati realizati per i dui MAMP cù genotipi re-randomizzati in ognuna di e duie corse.
I saggi di ROS sò stati realizati cum'è descrittu prima.In breve, per ogni linea, sei sementi sò stati piantati in 3 potes diffirenti.Da e piantini resultanti, trè sò stati scelti nantu à l'uniformità.I piantini chì parevanu inusual o eranu significativamente più altu o più brevi chì a maiuranza ùn sò micca usati.Quattru dischetti di foglia di 3 mm di diametru sò stati escissi da a parte più larga di a 4a foglia di trè diverse piante di sorgu di 15 ghjorni.Un discu per foglia da dui pianti è dui dischi da una pianta, cù u sicondu discu diventendu u cuntrollu di l'acqua (vede sottu).I dischi sò stati flottati individualmente nantu à 50 µl H20 in una piastra nera di 96 puits, sigillati cù un sigillu d'aluminiu per evità l'esposizione à a luce, è manteni à a temperatura di l'ambienti durante a notte.A matina dopu, una suluzione di reazione hè stata fatta cù 2 mg/ml sonda chemiluminescente L-012 (Wako, catalogu # 120-04891), 2 mg/ml perossidasi di rafanu (Tipu VI-A, Sigma-Aldrich, catalogu # P6782), è 100 mg/ml Chitina o 2 μM di Flg22.50 µl di sta suluzione di reazione hè stata aghjuntu à trè di i quattru pozzi.U quartu pozzu era un mock control, à quale a suluzione di reazione escludendu u MAMP hè stata aghjuntu.Quattru pozzi in biancu chì cuntenenu solu acqua sò stati ancu inclusi in ogni piastra.
Dopu avè aghjustatu a suluzione di reazione, a luminescenza hè stata misurata cù u lettore di micropiatti multi-detection SynergyTM 2 (BioTek) ogni 2 min per 1 ora.U lettore di piastra piglia misure di luminescenza ogni 2 min durante questa 1 h.A summa di tutte e 31 letture hè stata calculata per dà u valore per ogni pozzu.U valore stimatu per a risposta MAMP per ogni genotipu hè statu calculatu cum'è (valore mediu di luminescenza di i trè pozzi sperimentali - u valore di u mock well) -minus the average well well value.I valori di u pozzu in biancu eranu constantemente vicinu à cero.
dischi foglia diNicotiana benthamiana, una linea di sorghu d'alta rispunsibilità (SC0003), è una linea di sorgo di bassa rispunsibilità (PI 6069) sò stati ancu inclusi cum'è cuntrolli in ogni piastra di 96 pozzi per scopi di cuntrollu di qualità.
B. cookeipreparazione di inoculu è inoculazione
B. cookeil'inoculum hè statu preparatu cum'è descrittu prima.In breve, i grani di sorgo sò stati imbulighjati in l'acqua per trè ghjorni, lavati, scooped in flasks cône 1L è autoclaved per una ora à 15psi è 121 ° C.I graneddi sò stati poi inoculati cù circa 5 ml di mycelia macerated da una cultura fresca diB. cookeiLSLP18 isola è lasciate per 2 settimane à a temperatura di l'ambienti, scuzzulate i fiaschi ogni 3 ghjorni.Dopu à 2 simane, i graneddi di sorgu infestati da fungus sò stati secchi à l'aria è dopu guardati à 4 ° C finu à l'inoculazione di u campu.U listessu inoculu hè stata utilizata per tutta a prova è fatta fresca ogni annu.Per l'inoculazione, i graneddi infestati 6-10 sò stati posti in u verticinu di i pianti di sorgu di 4-5 settimane.E spore prodotte da questi fungi anu iniziatu l'infezzione in i pianti ghjovani di sorgu in una settimana.
Preparazione di sementi
Prima di piantà in u campu, a semente di sorgo hè stata trattata cù un fungicida, insecticida è una mistura di safener chì cuntene ~ 1% Spirato 480 FS fungicida, 4% Sebring 480 FS fungicida, 3% Sorpro 940 ES seed safener.Allora i graneddi sò stati siccati à l'aria per 3 ghjorni chì furnia una fina capa di sta mistura intornu à e sementi.U safener hà permessu l'usu di l'erbicida Dual Magnum cum'è trattamentu di pre-emergenza.
Valutazione di a resistenza di Target Leaf Spot
U SCP hè stata piantata à a Central Crops Research Station in Clayton, NC u 14-15 di ghjugnu 2017 è u 20 di ghjugnu 2018 in un disignu di bloccu cumpletu randomizatu cù duie replicazioni sperimentali in ogni casu.L'esperimenti sò stati piantati in 1,8 m fila singuli cù una larghezza di fila di 0,9 m cù 10 sementi per plot.Dui fila di cunfini sò stati piantati intornu à a periferia di ogni esperimentu per prevene effetti di bordu.L'esperimenti sò stati inoculati u 20 di lugliu di u 2017 è u 20 di lugliu di u 2018 à quale puntu i pianti di sorgo eranu in u stadiu di crescita 3. I valutazioni sò stati pigliati nantu à una scala di unu à nove, induve e piante chì ùn mostranu micca signali di malatia sò stati puntuati cum'è nove è cumpletamente. i pianti morti sò stati puntuati cum'è unu.Dui valutazioni sò state pigliate in 2017 è quattru letture in 2018 cuminciannu duie settimane dopu l'inoculazione ogni annu.sAUDPC (zona standardizzata sottu a curva di progressione di a malatia) hè stata calculata cum'è descritta prima.
Tempu di Postu: Apr-01-2021