Materiali vegetali è patogeni
Una pupulazione di mappatura di l'associazione di sorgu cunnisciuta cum'è a pupulazione di cunversione di sorgu (SCP) hè stata furnita da u duttore Pat Brown à l'Università di l'Illinois (avà à UC Davis). Hè stata descritta prima è hè una cullezzione di diverse linee cunvertite à insensibilità à u fotoperiodu è à statura più chjuca per facilità a crescita è u sviluppu di e piante in ambienti americani. 510 linee di sta pupulazione sò state aduprate in questu studiu, ancu s'è per via di una mala germinazione è altri prublemi di cuntrollu di qualità, micca tutte e linee sò state aduprate in l'analisi di tutti i trè tratti. Infine, i dati di 345 linee sò stati aduprati per l'analisi di a risposta à a chitina, 472 linee per a risposta à flg22 è 456 per a resistenza à TLS.B. cookeiA ceppa LSLP18 hè stata ottenuta da u duttore Burt Bluhm à l'Università di Arkansas.
Misurazione di a risposta MAMP
Dui MAMP diffirenti sò stati aduprati in questu studiu flg22, (catalogu Genscript # RP19986), è chitina. E piante di sorgu sò state cultivate in inserti posti nantu à piani pieni di terra (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) in a serra. E piante sò state innaffiate u ghjornu prima di a raccolta di u campione per evità l'umidità extra di e foglie u ghjornu di a raccolta.
E linee sò state aleatorie è, per ragioni logistiche, sò state piantate in lotti di 60 linee. Per ogni linea, sò stati piantati trè "vasi" cù duie sementi per linea. I lotti successivi sò stati piantati appena u lottu precedente hè statu trattatu finu à chì tutta a pupulazione hè stata valutata. Dui cicli sperimentali sò stati realizati per i dui MAMP cù genotipi ri-aleatorie in ognuna di e duie cicli.
I testi ROS sò stati realizati cum'è descrittu prima. In breve, per ogni linea, sei semi sò stati piantati in 3 vasi diversi. Da e piantine risultanti, trè sò state selezziunate in basa à l'uniformità. E piantine chì parevanu inusuali o eranu significativamente più alte o più basse di a maiò parte ùn sò state aduprate. Quattru dischi di foglie di 3 mm di diametru sò stati escisi da a parte più larga di a quarta foglia di trè diverse piante di sorgu di 15 ghjorni. Un discu per foglia da duie piante è dui dischi da una pianta, cù u secondu discu chì diventa u cuntrollu di l'acqua (vede sottu). I dischi sò stati fatti galleggiare individualmente nantu à 50 µl di H20 in una piastra nera à 96 pozzetti, sigillata cù un sigillo d'aluminiu per evità l'esposizione à a luce, è mantenuti à temperatura ambiente durante a notte. A mane dopu, una suluzione di reazione hè stata fatta aduprendu 2 mg/ml di sonda chemiluminescente L-012 (Wako, catalogu # 120-04891), 2 mg/ml di perossidasi di rafano (Tipu VI-A, Sigma-Aldrich, catalogu # P6782), è 100 mg/ml di Chitina o 2 μM di Flg22. 50 µl di sta suluzione di reazione sò stati aghjunti à trè di i quattru pozzetti. U quartu pozzettu era un cuntrollu simulatu, à u quale hè stata aghjunta a suluzione di reazione escludendu u MAMP. Quattru pozzetti bianchi chì cuntenenu solu acqua sò stati inclusi ancu in ogni piastra.
Dopu avè aghjuntu a suluzione di reazione, a luminescenza hè stata misurata cù u lettore di micropiastre multi-detezione SynergyTM 2 (BioTek) ogni 2 minuti per 1 ora. U lettore di piastre piglia misure di luminescenza ogni 2 minuti durante quest'ora. A somma di tutte e 31 letture hè stata calculata per dà u valore per ogni pozzettu. U valore stimatu per a risposta MAMP per ogni genotipu hè statu calculatu cum'è (valore mediu di luminescenza di i trè pozzetti sperimentali - u valore di u pozzettu fintu) - menu u valore mediu di u pozzettu biancu. I valori di u pozzettu biancu eranu constantemente vicini à zeru.
Dischi di foglie diNicotiana benthamiana, una linea di sorgu à alta reattività (SC0003), è una linea di sorgu à bassa reattività (PI 6069) sò state ancu incluse cum'è cuntrolli in ogni piastra à 96 pozzetti per scopi di cuntrollu di qualità.
B. cookeipreparazione di l'inoculu è inoculazione
B. cookeiL'inoculu hè statu preparatu cum'è descrittu prima. In breve, i grani di sorgu sò stati immersi in acqua per trè ghjorni, sciacquati, versati in fiaschi conici da 1 litru è autoclavati per un'ora à 15 psi è 121 °C. I grani sò stati poi inoculati cù circa 5 ml di miceli macerati da una cultura fresca diB. cookeiIsolati LSLP18 è lasciati per 2 settimane à temperatura ambiente, scuzzulendu i fiaschi ogni 3 ghjorni. Dopu à 2 settimane, i grani di sorgu infestati da funghi sò stati asciugati à l'aria è poi conservati à 4 °C finu à l'inoculazione in campu. U listessu inoculu hè statu utilizatu per tutta a prova è rinnuvatu ogni annu. Per l'inoculazione, 6-10 grani infestati sò stati posti in a spirale di piante di sorgu di 4-5 settimane. E spore prodotte da questi funghi anu iniziatu l'infezzione in e giovani piante di sorgu in una settimana.
Preparazione di e sementi
Prima di piantà in u campu, i graneddi di sorgu sò stati trattati cù una mistura di fungicida, insetticida è prutettore chì cuntene ~ 1% di fungicida Spirato 480 FS, 4% di fungicida Sebring 480 FS, 3% di prutettore di graneddi Sorpro 940 ES. Dopu, i graneddi sò stati asciugati à l'aria per 3 ghjorni, ciò chì hà furnitu un stratu finu di sta mistura intornu à i graneddi. U prutettore hà permessu l'usu di l'erbicida Dual Magnum cum'è trattamentu di pre-emergenza.
Valutazione di a resistenza à a macchia fogliare di u bersagliu
L'SCP hè statu piantatu à a Stazione Centrale di Ricerca di e Culture in Clayton, NC u 14-15 di ghjugnu 2017 è u 20 di ghjugnu 2018 in un disignu di blocchi cumpleti aleatorii cù duie repliche sperimentali in ogni casu. L'esperimenti sò stati piantati in file singole di 1,8 m cù una larghezza di fila di 0,9 m aduprendu 10 sementi per parcella. Dui file di cunfine sò state piantate intornu à a periferia di ogni esperimentu per prevene l'effetti di bordu. L'esperimenti sò stati inoculati u 20 di lugliu 2017 è u 20 di lugliu 2018, à quellu puntu e piante di sorgu eranu à u stadiu di crescita 3. E valutazioni sò state pigliate nantu à scale da unu à nove, induve e piante chì ùn mostravanu segni di malatia sò state valutate cum'è nove è e piante cumpletamente morte sò state valutate cum'è unu. Dui valutazioni sò state pigliate in u 2017 è quattru letture in u 2018 à partesi da duie settimane dopu l'inoculazione ogni annu. sAUDPC (area standardizata sottu a curva di progressione di a malatia) hè stata calculata cum'è descrittu prima.
Data di publicazione: 01 d'aprile 2021