A fosforilazione attiva u regulatore di crescita principale DELLA in Arabidopsis prumovendu l'associazione di l'istone H2A cù a cromatina.

E proteine ​​DELLA sò maestre cunservateregulatori di crescitachì ghjocanu un rollu cintrali in u cuntrollu di u sviluppu di e piante in risposta à i signali interni è ambientali. DELLA agisce cum'è un regulatore trascrizionale è hè reclutatu per indirizzà i promotori ligandu si à i fattori di trascrizione (TF) è l'istone H2A attraversu u so duminiu GRAS. Studi recenti anu dimustratu chì a stabilità di DELLA hè regulata post-traduzionale attraversu dui meccanismi: a poliubiquitinazione indotta da a fitoormone gibberellina, chì porta à a so rapida degradazione, è a cunjugazione di picculi modificatori simili à l'ubiquitina (SUMO) per aumentà a so accumulazione. Inoltre, l'attività di DELLA hè regulata dinamicamente da duie diverse glicosilazioni: l'interazzione DELLA-TF hè rinfurzata da l'O-fucosilazione ma inibita da a mudificazione di N-acetilglucosamina ligata à O (O-GlcNAc). Tuttavia, u rollu di a fosforilazione di DELLA ferma pocu chjaru, postu chì studii precedenti anu dimustratu risultati cuntradittori, chì varieghjanu da quelli chì mostranu chì a fosforilazione prumove o riduce a degradazione di DELLA à altri chì mostranu chì a fosforilazione ùn influenza micca a so stabilità. Quì, identifichemu i siti di fosforilazione in REPRESSOR.ga1-3(RGA, AtDELLA) purificati da Arabidopsis thaliana per analisi di spettrometria di massa è mostranu chì a fosforilazione di dui peptidi RGA in e regioni PolyS è PolyS/T prumove u ligame H2A è l'attività RGA aumentata. Associazione di RGA cù i promotori bersagli. In particulare, a fosforilazione ùn influenza micca l'interazioni RGA-TF o a stabilità RGA. U nostru studiu revela u mecanismu moleculare per u quale a fosforilazione induce l'attività DELLA.
Per elucidà u rolu di a fosforilazione in a regulazione di a funzione DELLA, hè cruciale identificà i siti di fosforilazione DELLA in vivo è realizà analisi funziunali in e piante. Per purificazione per affinità di estratti vegetali seguita da analisi MS/MS, avemu identificatu parechji fosfositi in RGA. In cundizioni di carenza di GA, a fosforilazione di RHA aumenta, ma a fosforilazione ùn influenza micca a so stabilità. Impurtantemente, i testi co-IP è ChIP-qPCR anu rivelatu chì a fosforilazione in a regione PolyS/T di RGA prumove a so interazione cù H2A è a so associazione cù i promotori bersagli, rivelendu u mecanismu per u quale a fosforilazione induce a funzione RGA.
RGA hè reclutatu per destinà a cromatina per via di l'interazzione di u sottuduminiu LHR1 cù TF è dopu si lega à H2A per via di a so regione PolyS/T è u sottuduminiu PFYRE, furmendu u cumplessu H2A-RGA-TF per stabilizà RGA. A fosforilazione di Pep 2 in a regione PolyS/T trà u duminiu DELLA è u duminiu GRAS da una chinasi micca identificata aumenta u ligame RGA-H2A. A proteina mutante rgam2A abolisce a fosforilazione RGA è adotta una cunfurmazione proteica diversa per interferisce cù u ligame H2A. Questu si traduce in a destabilizazione di l'interazzione TF-rgam2A transitoria è a dissociazione di rgam2A da a cromatina bersagliu. Sta figura rapprisenta solu a repressione trascrizionale mediata da RGA. Un mudellu simile puderia esse discrittu per l'attivazione trascrizionale mediata da RGA, eccettu chì u cumplessu H2A-RGA-TF prumove a trascrizione di u genu bersagliu è a defosforilazione di rgam2A diminuisce a trascrizione. Figura mudificata da Huang et al.21.
Tutti i dati quantitativi sò stati analizati statisticamente cù Excel, è e differenze significative sò state determinate cù u test t di Student. Nisun metudu statisticu hè statu utilizatu per determinà preliminarmente a dimensione di u campione. Nisun datu hè statu esclusu da l'analisi; l'esperimentu ùn era micca aleatoriu; i circadori ùn eranu micca cechi à a distribuzione di i dati durante l'esperimentu è a valutazione di i risultati. A dimensione di u campione hè indicata in a legenda di a figura è in u schedariu di dati surghjente.
Per più infurmazione nantu à u disignu di u studiu, vedi u Riassuntu di u Rapportu di Portfolio Naturale assuciatu à questu articulu.
I dati di a proteomica di a spettrometria di massa sò stati cuntribuiti à u consorziu ProteomeXchange per mezu di u repositoriu di partenarii PRIDE66 cù l'identificatore di u dataset PXD046004. Tutti l'altri dati ottenuti durante questu studiu sò presentati in l'infurmazioni supplementari, i fugliali di dati supplementari è i fugliali di dati grezzi. I dati di fonte sò furniti per questu articulu.