Phosphorylation attivate u regulatore di crescita maestru DELLA in Arabidopsis da prumove l'associu di histone H2A cù chromatin.

proteini DELLA sò cunsirvatu maestruregulatori di crescitachì ghjucanu un rolu cintrali in u cuntrollu di u sviluppu di e piante in risposta à i segnali interni è ambientali. DELLA agisce cum'è un regulatore di trascrizzione è hè ricrutatu à i promotori di destinazione per ubligatoriu à i fatturi di trascrizione (TF) è l'histone H2A attraversu u so duminiu GRAS. Studi recenti anu dimustratu chì a stabilità di DELLA hè regulata post-traduzzione per mezu di dui miccanismi: polyubiquitination induced by the phytohormone gibberellin, chì porta à a so degradazione rapida, è cunjugation of small ubiquitin-like modifiers (SUMO) per aumentà a so accumulazione. Inoltre, l'attività di DELLA hè dinamicamente regulata da dui glycosylations differenti: l'interazzione DELLA-TF hè rinfurzata da O-fucosylation ma inhibita da a modificazione di N-acetylglucosamine O-linked (O-GlcNAc). Tuttavia, u rolu di DELLA phosphorylation resta unclear, cum'è studii pricidenti anu dimustratu risultati cunflittu, chì varieghja da quelli chì mostranu chì phosphorylation prumove o riduce a degradazione DELLA à l'altri chì mostranu chì phosphorylation ùn hà micca a so stabilità. Quì, identificemu siti di fosforilazione in REPRESSORga1-3(RGA, AtDELLA) purificatu da Arabidopsis thaliana da l'analisi di spettrometria di massa è mostranu chì a fosforilazione di dui peptidi RGA à e regioni PolyS è PolyS / T prumove a legame H2A è l'attività RGA rinfurzata. Associazione di RGA cù i promotori di destinazione. In particulare, a fosforilazione ùn affetta micca l'interazzione RGA-TF o a stabilità RGA. U nostru studiu palesa u miccanisimu mulekulari da chì phosphorylation induces attività DELLA.
Per elucidà u rolu di a fosforilazione in a regulazione di a funzione DELLA, hè cruciale identificà i siti di fosforilazione DELLA in vivo è realizà analisi funziunali in e piante. Per purificazione per affinità di estratti vegetali seguita da analisi MS/MS, avemu identificatu parechji fosfositi in RGA. In cundizioni di carenza di GA, a fosforilazione di RHA aumenta, ma a fosforilazione ùn influenza micca a so stabilità. Impurtantemente, i testi co-IP è ChIP-qPCR anu rivelatu chì a fosforilazione in a regione PolyS/T di RGA prumove a so interazione cù H2A è a so associazione cù i promotori bersagli, rivelendu u mecanismu per u quale a fosforilazione induce a funzione RGA.
RGA hè reclutatu per destinà a cromatina per mezu di l'interazzione di u subdominiu LHR1 cù TF è poi si unisce à H2A attraversu a so regione PolyS / T è u subdominiu PFYRE, furmendu u cumplessu H2A-RGA-TF per stabilizzà RGA. A fosforilazione di Pep 2 in a regione PolyS / T trà u duminiu DELLA è u duminiu GRAS da una kinase micca identificata aumenta a ligatura RGA-H2A. A proteina mutante rgam2A abolisce a fosforilazione RGA è adopra una cunfurmazione di prutezione differente per interferiscenu cù u ligame H2A. Questu risultatu in a destabilizazione di l'interazzioni transitori TF-rgam2A è a dissociazione di rgam2A da a cromatina di destinazione. Questa figura mostra solu a ripressione trascrizionale mediata da RGA. Un mudellu simili puderia esse descrittu per l'attivazione trascrizionale mediata da RGA, salvu chì u cumplessu H2A-RGA-TF prumove a trascrizzione di geni di destinazione è a defosforilazione di rgam2A diminuiria a trascrizione. Figura mudificata da Huang et al.21.
Tutti i dati quantitativi sò stati analizati statisticamente cù Excel, è e differenze significative sò state determinate cù u test t di Student. Nisun mètudu statisticu hè statu utilizatu per determinà preliminarmente a dimensione di mostra. Nisuna data hè stata esclusa da l'analisi; l'esperimentu ùn hè micca randomized; i circadori ùn anu micca cecu à a distribuzione di dati durante l'esperimentu è a valutazione di i risultati. A dimensione di mostra hè indicata in a legenda di a figura è in u schedariu di dati fonte.
Per più infurmazione nantu à u disignu di studiu, vede u Natural Portfolio Report Abstract assuciatu à questu articulu.
I dati di proteomica di spettrometria di massa sò stati cuntribuiti à u cunsorziu ProteomeXchange attraversu u repositoriu di i partenarii PRIDE66 cù l'identificatore di dataset PXD046004. Tutte l'altri dati ottenuti durante stu studiu sò presentati in l'Informazioni Supplementari, i File di Dati Supplementari è i File di Dati Raw. A fonte di dati hè furnita per questu articulu.