Stu studiu hà valutatu a letalità, a subletalità è a toxicità di u cummercialecipermetrinaformulazioni ai girini anurani. In a prova acuta, cuncentrazioni di 100-800 μg/L sò stati pruvati per 96 h. In a prova cronica, i cuncentrazioni di cipermetrina naturali (1, 3, 6 è 20 μg / L) sò stati pruvati per a mortalità, seguita da teste di micronucleus è anomalie nucleari di globuli rossi per 7 ghjorni. A LC50 di a formulazione di cipermetrina cummerciale à i girini era 273,41 μg L-1. In a prova cronica, a più alta cuncentrazione (20 μg L-1) hà risultatu in più di 50% di mortalità, cum'è hà uccisu a mità di i tadpoles pruvati. A prova di u micronucleu dimustrava risultati significativi à 6 è 20 μg L-1 è parechji anormalità nucleari sò stati rilevati, chì indicanu chì a formulazione di cipermetrina cummerciale hà un putenziale genotossicu contru P. gracilis. A cipermetrina hè un risicu altu per questa spezia, chì indica chì pò causà parechje prublemi è affettanu a dinamica di questu ecosistema in u cortu è longu tempu. Per quessa, pò esse cunclusu chì e formulazioni di cipermetrina cummerciale anu effetti tossichi nantu à P. gracilis.
A causa di l'espansione cuntinuu di l'attività agricula è l'applicazione intensiva dicuntrollu di pestimisure, l'animali acquatici sò spessu esposti à pesticidi1,2. A contaminazione di i risorsi d'acqua vicinu à i campi agriculi pò influenzà u sviluppu è a sopravvivenza di l'organisimi micca di destinazione cum'è l'anfibii.
L'anfibii diventanu sempre più impurtanti in a valutazione di e matrici ambientali. Anurani sò cunsiderati boni bioindicatori di i contaminanti ambientali per via di e so caratteristiche uniche cum'è i ciculi di vita cumplessi, a rapidità di crescita di larva, u statu troficu, a pelle permeable10,11, a dependenza di l'acqua per a ripruduzzione12 è l'ova senza prutezzione11,13,14. La petite grenouille d'eau (Physalaemus gracilis), communément appelée grenouille pleureuse, est une espèce bioindicatrice de la pollution par les pesticides4,5,6,7,15. A spezia si trova in acque stagnanti, zoni prutetti o spazii cù habitat variabile in Argentina, Uruguay, Paraguay è Brasile1617 è hè cunsiderata stabile da a classificazione IUCN per via di a so larga distribuzione è a tolleranza di diversi abitati18.
Effetti subletali sò stati signalati in l'anfibi dopu l'esposizione à a cipermetrina, cumpresi cambiamenti cumportamentali, morfologichi è biochimici in i tadpoles23,24,25, alterazione di a mortalità è u tempu di metamorfosi, cambiamenti enzimatici, diminuzione di successu di schiusura24,25, iperattività26, inibizione di l'attività di colinesterasi27,28. Tuttavia, studii di l'effetti genotossichi di a cipermetrina in l'anfibi sò limitati. Per quessa, hè impurtante per valutà a suscettibilità di spezie anuran à a cipermetrina.
A contaminazione ambientale affetta a crescita normale è u sviluppu di l'anfibii, ma l'effettu avversu più seriu hè u dannu geneticu à l'ADN causatu da l'esposizione à i pesticidi13. L'analisi di a morfologia di e cellule di sangue hè un bioindicatore impurtante di a contaminazione è a tossicità potenziale di una sustanza à spezie salvatiche29. A prova di micronucleus hè unu di i metudi più cumunimenti utilizati per determinà a genotossicità di i sustanzi chimichi in l'ambiente30. Hè un metudu rapidu, efficace è prezzu chì hè un bon indicatore di a contaminazione chimica di l'organisimi cum'è l'anfibii31,32 è pò furnisce infurmazioni nantu à l'esposizione à i contaminanti genotossichi33.
L'ughjettu di stu studiu era di valutà u potenziale tossicu di e formulazioni di cipermetrina cummerciale à i picculi capretti acquatici utilizendu una prova di micronucleu è una valutazione di risicu ecologicu.
A mortalità cumulativa (%) di i tadpoles di P. gracilis esposti à diverse concentrazioni di cipermetrina cummerciale durante u periodu acutu di a prova.
A mortalità cumulativa (%) di i tadpoles di P. gracilis esposti à diverse concentrazioni di cipermetrina cummerciale durante una prova cronica.
L'alta mortalità osservata era u risultatu di l'effetti genotossichi in l'anfibii esposti à diverse concentrazioni di cipermetrina (6 è 20 μg/L), cum'è pruvucatu da a presenza di micronuclei (MN) è anormalità nucleari in eritrociti. A furmazione di MN indica errori in a mitosi è hè assuciata à un poviru ligame di i cromosomi à i microtubuli, difetti in i complexi di proteini rispunsevuli di l'assunzione è u trasportu di cromusomi, errori in a segregazione di cromusomi è errori in a riparazione di danni à l'ADN38,39 è pò esse ligati à u stress oxidativu indottu da pesticidi40,41. Altre anormalità sò state osservate à tutte e cuncentrazioni valutate. L'aumentu di a concentrazione di cipermetrina hà aumentatu l'anormalità nucleari in eritrociti da 5% è 20% à e dosi più bassu (1 μg / L) è più altu (20 μg / L), rispettivamente. Per esempiu, i cambiamenti in l'ADN di una spezia pò avè cunsiquenzi serii per a sopravvivenza à cortu è à longu andà, risultatu in a diminuzione di a pupulazione, alterazione di a capacità riproduttiva, inbreeding, perdita di diversità genetica, è alterazione di i tassi di migrazione. Tutti questi fattori ponu influenzà a sopravvivenza è u mantenimentu di e spezie42,43. A furmazione di anormalità eritroide pò indicà un bloccu in a citocinesi, risultatu in una divisione cellulare anormale (eritrociti binucleati)44,45; nuclei multilobulati sò protrusioni di a membrana nucleare cù lobi multipli46, mentri àutri anormalità eritroide pò esse assuciati cù l'amplificazione di l'ADN, cum'è i rini nucleari / blebs47. A prisenza di eritrociti anucleati pò indicà un trasportu di l'ossigenu indebolitu, in particulare in acqua contaminata48,49. L'apoptosi indica a morte cellulare50.
Altri studii anu ancu dimustratu l'effetti genotossichi di a cipermetrina. Kabaña et al.51 hà dimustratu a prisenza di micronuclei è cambiamenti nucleari, cum'è e cellule binucleate è apoptotic cells in Odontophrynus americanus, dopu l'esposizione à alta concentrazione di cipermetrina (5000 è 10,000 μg L-1) per 96 h. L'apoptosi indotta da a cipermetrina hè stata ancu rilevata in P. biligonigerus52 è Rhinella arenarum53. Questi risultati suggerenu chì a cipermetrina hà effetti genotossichi nantu à una varietà di organismi acquatici è chì l'analisi MN è ENA pò esse un indicatore di effetti subletali nantu à l'anfibii è pò esse applicabile à spezie native è pupulazioni salvatichi esposti à tossici12.
E formulazioni cummirciali di cipermetrina ponenu un periculu ambientale elevatu (sia acutu sia cronicu), cù HQ chì superanu u livellu di l'Agenzia di Proteczione Ambientale di i Stati Uniti (EPA) 54 chì ponu affettà negativamente l'spezie se presente in l'ambiente. Dans l'évaluation du risque chronique, la NOEC de mortalité était de 3 μg L−1, ce qui confirme que les concentrations trouvées dans l'eau peuvent poser un risque pour l'espèce55. U NOEC letale per a larva di R. arenarum esposti à una mistura di endosulfan è cypermethrin era 500 μg L-1 dopu à 168 h; stu valore diminuì à 0,0005 μg L−1 dopu à 336 h. L'autori dimustranu chì più longu hè l'esposizione, più bassu sò e cuncentrazioni chì sò dannusu à l'spezie. Hè impurtante ancu di mette in risaltu chì i valori NOEC eranu più altu ch'è quelli di P. gracilis à u stessu tempu d'esposizione, chì indicanu chì a risposta di l'spezie à a cipermetrina hè specifica di spezie. Inoltre, in quantu à a mortalità, u valore CHQ di P. gracilis dopu l'esposizione à a cipermetrina hà righjuntu 64,67, chì hè più altu ch'è u valore di riferimentu stabilitu da l'Agenzia di Proteczione Ambientale di i Stati Uniti54, è u valore CHQ di R. arenarum larvae era ancu più altu ch'è questu valore (CHQ> 388,00 dopu à 336 h, chì ponenu parechji insecticidi studiati un altu risicu per l'insecticidi studiati). spezie. Cunsiderendu chì P. gracilis richiede circa 30 ghjorni per cumprità a metamorfosi56, si pò cuncludi chì e cuncintrazioni studiate di cipermetrina pò cuntribuisce à a diminuzione di a pupulazione impediscendu chì l'individui infettati entre in u stadiu adultu o riproduttivu à una prima età.
In a valutazione di risicu calculata di i micronuclei è altri anormalità nucleari di eritrociti, i valori CHQ varienu da 14,92 à 97,00, chì indicanu chì a cipermetrina hà avutu un risicu genotossicu potenziale à P. gracilis ancu in u so habitat naturali. In cunsiderà a mortalità, a massima concentrazione di composti xenobiotichi tolerate à P. gracilis era 4,24 μg L-1. In ogni casu, cuncentrazioni quant'è 1 μg/L anu ancu dimustratu effetti genotossichi. Stu fattu pò purtà à un aumentu di u nùmeru d'individui anormali57 è affettà u sviluppu è a ripruduzzione di e spezie in i so abitati, purtendu à una calata di pupulazioni anfibi.
E formulazioni cummirciali di l'insecticida cipermetrina anu mostratu una alta toxicità aguda è crònica à P. gracilis. I tassi di mortalità più altu sò stati osservati, prubabilmente per l'effetti tossichi, cum'è pruvucatu da a prisenza di micronuclei è anormalità nucleari di eritrociti, in particulare nuclei serrati, nuclei lobulati è nuclei vesiculari. Inoltre, a spezia studiata hà dimustratu risichi ambientali aumentati, aguti è cronichi. Questi dati, cumminati cù studii precedenti da u nostru gruppu di ricerca, anu dimustratu chì ancu diverse formulazioni cummirciali di cipermetrina anu ancu causatu una diminuzione di l'attività di acetilcolinesterasi (AChE) è butirilcolinesterasi (BChE) è stress ossidativu58, è hà risultatu in cambiamenti in l'attività di nuoto è malformazioni orali59 in P. gracilis, chì indicanu chì e formulazioni letali è sub-tossicità di cummercializazioni sò elevate. sta spezia. Hartmann et al. 60 truvaru chì e formulazioni cummerciale di cipermetrina eranu i più tossichi per P. gracilis è altre spezie di u stessu genus (P. cuvieri) cumparatu cù novi altri pesticidi. Questu suggerisce chì e cuncentrazioni appruvate legalmente di cipermetrina per a prutezzione di l'ambiente pò esse risultatu in una alta mortalità è una diminuzione di a pupulazione à longu andà.
Ulteriori studii sò necessarii per valutà a toxicità di u pesticidi à l'anfibii, postu chì e cuncentrazioni truvate in l'ambienti ponu causà alta mortalità è ponu un risicu potenziale per P. gracilis. A ricerca nantu à e spezie anfibii deve esse incuraghjite, postu chì e dati nantu à questi urganismi sò scarsi, in particulare nantu à e spezie brasiliane.
A prova di toxicità cronica durò 168 h (7 ghjorni) in cundizioni statiche è e cuncentrazioni subletali eranu: 1, 3, 6 è 20 μg ai L−1. In i dui esperimenti, 10 tadpoles per gruppu di trattamentu sò stati valutati cù sei replicati, per un totale di 60 tadpoles per cuncentrazione. Intantu, u trattamentu solu d'acqua hà servitu cum'è un cuntrollu negativu. Ogni setup sperimentale cunsiste in un vetru sterile cù una capacità di 500 ml è una densità di 1 tadpole per 50 ml di suluzione. U flask hè cupartu cù film di polietilene per impedisce l'evaporazione è hè stata aerata continuamente.
L'acqua hè stata analizata chimicamente per determinà a concentrazione di pesticidi à 0, 96 è 168 h. Sicondu Sabin et al. 68 è Martins et al. 69, l'analisi sò stati realizati à u Laboratoriu d'Analisi di Pesticidi (LARP) di l'Università Federale di Santa Maria cù a cromatografia di gas accumpagnata à l'espectrometria di massa triple quadrupole (Varian model 1200, Palo Alto, California, USA). A determinazione quantitativa di pesticidi in l'acqua hè indicata cum'è materiale supplementu (Table SM1).
Per a prova di micronucleus (MNT) è a prova di anormalità nucleare di cellule rosse (RNA), sò stati analizzati 15 caprini da ogni gruppu di trattamentu. I tadpoles sò stati anestetizzati cù 5% lidocaine (50 mg g-170) è i campioni di sangue sò stati raccolti per puntura cardiaca cù siringhe eparinizzate dispunibuli. I smears di sangue sò stati preparati nantu à diapositive di microscopiu sterile, siccati à l'aria, fissati cù 100% metanol (4 ° C) per 2 min, è dopu macchiati cù 10% suluzione Giemsa per 15 min in u bughju. À a fine di u prucessu, i diapositivi sò lavati cù acqua distillata per sguassà l'excedente di macchia è siccati à a temperatura di l'ambienti.
Almenu 1000 RBC da ogni tadpole sò stati analizati cù un microscopiu 100 × cù un scopu 71 per determinà a presenza di MN è ENA. Un totale di 75,796 RBCs da i tadpoles sò stati valutati in cuncentrazione di cipermetrina è cuntrolli. A genotoxicità hè stata analizata secondu u metudu di Carrasco et al. è Fenech et al.38,72 per determinà a freccia di e seguenti lesioni nucleari: (1) cellule anucleate: cellule senza nuclei; (2) cellule apoptotiche: frammentazione nucleare, morte cellulare programata; (3) cellula binucleate: cellula cù dui nuclei; (4) germogli nucleari o bleb cells: cells with nuclei with small protrusions of the nuclear membrane, blebs similar in size to micronuclei; (5) cellula caryolyzed: cellula cù solu u cuntornu di u nucleu senza materiale internu; (6) cellule intagliate : cellule cù nuclei cù cracke evidenti o tacche in a so forma, chjamati ancu nuclei in forma di rino; (7) cellule lobulate: cellule cù protrusioni nucleari più grande di e vesiculi citati; è (8) microcells: celluli cù nuclei cundensati è citoplasma ridutta. I cambiamenti sò stati paragunati cù i risultati di cuntrollu negativu.
I risultati di a prova di tossicità acuta (LC50) sò stati analizati cù u software GBasic è u metudu TSK-Trimmed Spearman-Karber74. I dati di teste croniche sò stati pretestati per a normalità di l'errore (Shapiro-Wilks) è l'homogeneità di a varianza (Bartlett). I risultati sò stati analizati cù l'analisi di varianza unidirezionale (ANOVA). A prova di Tukey hè stata utilizata per paragunà e dati trà elli, è a prova di Dunnett hè stata utilizata per paragunà e dati trà u gruppu di trattamentu è u gruppu di cuntrollu negativu.
I dati LOEC è NOEC sò stati analizati cù a prova di Dunnett. I testi statistichi sò stati realizati cù u software Statistica 8.0 (StatSoft) cù un livellu di significazione di 95% (p <0.05).
Tempu di Postu: Mar-13-2025