A leishmaniosi viscerale (VL), cunnisciuta cum'è kala-azar in u subcontinente indianu, hè una malatia parassitaria causata da u protozoariu flagellatu Leishmania chì pò esse fatale s'ella ùn hè micca trattata prontamente. U pappatacinu Phlebotomus argentipes hè l'unicu vettore cunfirmatu di VL in u Sudeste Asiaticu, induve hè cuntrullatu da a spruzzatura residuale in interni (IRS), un insetticida sinteticu. L'usu di DDT in i prugrammi di cuntrollu di VL hà purtatu à u sviluppu di resistenza in i pappatacini, dunque u DDT hè statu rimpiazzatu da l'insetticida alfa-cipermetrina. Tuttavia, l'alfa-cipermetrina agisce in modu simile à u DDT, dunque u risicu di resistenza in i pappatacini aumenta sottu à u stress causatu da l'esposizione ripetuta à questu insetticida. In questu studiu, avemu valutatu a suscettibilità di e zanzare salvatiche è di a so progenie F1 utilizendu u biotest in buttiglia CDC.
Avemu raccoltu zanzare da 10 paesi in u distrettu di Muzaffarpur di Bihar, India. Ottu paesi anu cuntinuatu à aduprà insetticidi à alta putenza.cipermetrinaPer a spruzzatura in interni, un paese hà smessu di utilizà a cipermetrina à alta putenza per a spruzzatura in interni, è un paese ùn hà mai utilizatu a cipermetrina à alta putenza per a spruzzatura in interni. I zanzare raccolti sò stati esposti à una dosa diagnostica predefinita per un tempu definitu (3 μg/ml per 40 min), è u tassu di knockdown è a mortalità sò stati registrati 24 ore dopu l'esposizione.
I tassi di mortalità di e zanzare salvatiche variavanu da 91,19% à 99,47%, è quelli di e so generazioni F1 variavanu da 91,70% à 98,89%. Ventiquattru ore dopu l'esposizione, a mortalità di e zanzare salvatiche variava da 89,34% à 98,93%, è quella di a so generazione F1 variava da 90,16% à 98,33%.
I risultati di stu studiu indicanu chì a resistenza pò sviluppassi in P. argentipes, ciò chì indica a necessità di un monitoraghju è di una vigilanza cuntinui per mantene u cuntrollu una volta chì l'eradicazione hè stata ottenuta.
A leishmaniosi viscerale (VL), cunnisciuta cum'è kala-azar in u subcontinente indianu, hè una malatia parassitaria causata da u protozoariu flagellatu Leishmania è trasmessa per via di a puntura di mosche di pappataci femine infettate (Diptera: Myrmecophaga). I mosche di pappataci sò l'unicu vettore cunfirmatu di VL in u Sudeste Asiaticu. L'India hè vicina à ghjunghje à l'ubbiettivu di eliminà a VL. Tuttavia, per mantene bassi tassi d'incidenza dopu l'eradicazione, hè cruciale riduce a pupulazione di vettori per prevene una putenziale trasmissione.
U cuntrollu di e zanzare in l'Asia sudorientale si faci per mezu di a spruzzatura residuale in interni (IRS) cù insetticidi sintetici. U cumpurtamentu secretu di riposu di e zampe d'argentu ne face un bersagliu adattatu per u cuntrollu di l'insetticidi per mezu di a spruzzatura residuale in interni [1]. A spruzzatura residuale in interni di diclorodifeniltricloroetanu (DDT) sottu à u Prugramma Naziunale di Cuntrollu di a Malaria in India hà avutu effetti significativi in u cuntrollu di e pupulazioni di zanzare è in a riduzione significativa di i casi di VL [2]. Stu cuntrollu micca pianificatu di VL hà incitatu u Prugramma Indianu di Eradicazione di VL à aduttà a spruzzatura residuale in interni cum'è u metudu principale di cuntrollu di e zampe d'argentu. In u 2005, i guverni di l'India, di u Bangladesh è di u Nepal anu firmatu un memorandum d'intesa cù l'ubbiettivu di eliminà a VL da u 2015 [3]. I sforzi di eradicazione, chì implicanu una cumbinazione di cuntrollu di i vettori è di diagnosi è trattamentu rapidi di i casi umani, eranu destinati à entre in a fase di cunsulidazione da u 2015, un ubbiettivu successivamente rivistu à u 2017 è dopu à u 2020.[4] A nova roadmap glubale per eliminà e malatie tropicali trascurate include l'eliminazione di VL da u 2030.[5]
Mentre l'India entra in a fase di post-eradicazione di BCVD, hè imperativu assicurà chì ùn si sviluppi una resistenza significativa à a beta-cipermetrina. A ragione di a resistenza hè chì sia u DDT sia a cipermetrina anu u listessu mecanismu d'azione, vale à dì, miranu à a proteina VGSC [21]. Cusì, u risicu di sviluppu di resistenza in i pappataci pò esse aumentatu da u stress causatu da l'esposizione regulare à a cipermetrina assai putente. Hè dunque imperativu monitorà è identificà e putenziali pupulazioni di pappataci resistenti à questu insetticida. In questu cuntestu, l'ughjettivu di questu studiu era di monitorà u statu di suscettibilità di i pappataci salvatichi utilizendu dosi diagnostiche è durate di esposizione determinate da Chaubey et al. [20] anu studiatu P. argentipes da diversi paesi in u distrettu di Muzaffarpur di Bihar, India, chì anu utilizatu continuamente sistemi di spruzzatura interni trattati cù cipermetrina (villaggi IPS continui). U statutu di suscettibilità di P. argentipes salvaticu di i paesi chì avianu cessatu di utilizà sistemi di spruzzatura interna trattati cù cipermetrina (ex paesi IPS) è quelli chì ùn avianu mai utilizatu sistemi di spruzzatura interna trattati cù cipermetrina (paesi senza IPS) sò stati paragunati utilizendu u biotest in buttiglia CDC.
Dece paesi sò stati selezziunati per u studiu (Fig. 1; Tavula 1), di i quali ottu avianu una storia di spruzzatura interna cuntinua di piretroidi sintetici (ipermetrina; designati cum'è paesi di ipermetrina cuntinua) è avianu casi di VL (almenu un casu) in l'ultimi 3 anni. Di i dui paesi rimanenti in u studiu, un paese chì ùn hà micca implementatu a spruzzatura interna di beta-cipermetrina (paese senza spruzzatura interna) hè statu sceltu cum'è paese di cuntrollu è l'altru paese chì avia una spruzzatura interna intermittente di beta-cipermetrina (paese di spruzzatura interna intermittente / ex paese di spruzzatura interna) hè statu sceltu cum'è paese di cuntrollu. A selezzione di sti paesi hè stata basata nantu à a coordinazione cù u Dipartimentu di a Salute è a Squadra di Spruzzatura Interna è a validazione di u Pianu d'Azione Micro di Spruzzatura Interna in u Distrettu di Muzaffarpur.
Carta geografica di u distrettu di Muzaffarpur chì mostra l'ubicazione di i paesi inclusi in u studiu (1-10). Lochi di studiu: 1, Manifulkaha; 2, Ramdas Majhauli; 3, Madhubani; 4, Anandpur Haruni; 5, Pandey; 6, Hirapur; 7, Madhopur Hazari; 8, Hamidpur; 9, Noonfara; 10, Simara. A carta hè stata preparata cù u software QGIS (versione 3.30.3) è Open Assessment Shapefile.
E buttiglie per l'esperimenti d'esposizione sò state preparate secondu i metudi di Chaubey et al. [20] è Denlinger et al. [22]. In breve, buttiglie di vetru di 500 mL sò state preparate un ghjornu prima di l'esperimentu è a parete interna di e buttiglie hè stata rivestita cù l'insetticida indicatu (a dosa diagnostica di α-cipermetrina era di 3 μg/mL) applicendu una soluzione d'acetone di l'insetticida (2,0 mL) à u fondu, à e pareti è à u tappu di e buttiglie. Ogni buttiglia hè stata poi asciugata nantu à un rullu meccanicu per 30 minuti. Durante questu tempu, svitate lentamente u tappu per permette à l'acetone di evaporà. Dopu à 30 minuti di asciugatura, cacciate u tappu è girate a buttiglia finu à chì tutta l'acetone sia evaporata. E buttiglie sò state poi lasciate aperte à asciugare tutta a notte. Per ogni test replicatu, una buttiglia, aduprata cum'è cuntrollu, hè stata rivestita cù 2,0 mL di acetone. Tutte e buttiglie sò state riutilizzate durante l'esperimenti dopu una pulizia adatta secondu a prucedura descritta da Denlinger et al. è l'Organizazione Mondiale di a Salute [22, 23].
U ghjornu dopu à a preparazione di l'insetticida, 30-40 zanzare salvatiche (femmine affamate) sò state cacciate da e gabbie in fiale è soffiate delicatamente in ogni fiala. Circa u listessu numeru di mosche hè statu utilizatu per ogni buttiglia rivestita d'insetticida, cumpresu u cuntrollu. Ripetite questu almenu cinque o sei volte in ogni paese. Dopu à 40 minuti di esposizione à l'insetticida, hè statu registratu u numeru di mosche abbattute. Tutte e mosche sò state catturate cù un aspiratore meccanicu, piazzate in contenitori di cartone da una pinta cuparti di maglia fine, è piazzate in un incubatore separatu sottu à e stesse cundizioni di umidità è temperatura cù a stessa fonte di alimentu (palline di cuttone imbevute in una soluzione di zuccheru à u 30%) cum'è e culonie micca trattate. A mortalità hè stata registrata 24 ore dopu l'esposizione à l'insetticida. Tutte e zanzare sò state dissezionate è esaminate per cunfirmà l'identità di e spezie. A stessa procedura hè stata effettuata cù e mosche di a discendenza F1. I tassi di abbattimentu è di mortalità sò stati registrati 24 ore dopu l'esposizione. Se a mortalità in e buttiglie di cuntrollu era <5%, ùn hè stata fatta alcuna currezzione di mortalità in e repliche. Sè a mortalità in a buttiglia di cuntrollu era ≥ 5% è ≤ 20%, a mortalità in e buttiglie di prova di quella replica hè stata curretta aduprendu a formula d'Abbott. Sè a mortalità in u gruppu di cuntrollu hà superatu u 20%, tuttu u gruppu di prova hè statu scartatu [24, 25, 26].
Mortalità media di e zanzare P. argentipes catturate in natura. E barre d'errore rapprisentanu l'errori standard di a media. L'intersezione di e duie linee urizzuntali rosse cù u graficu (mortalità di 90% è 98%, rispettivamente) indica a finestra di mortalità in a quale si pò sviluppà a resistenza.[25]
Mortalità media di a progenie F1 di P. argentipes catturati in natura. E barre d'errore rapprisentanu l'errori standard di a media. E curve intersecate da e duie linee orizzontali rosse (mortalità di 90% è 98%, rispettivamente) rapprisentanu a gamma di mortalità in a quale si pò sviluppà a resistenza [25].
E zanzare in u paese di cuntrollu/senza IRS (Manifulkaha) sò state trovate assai sensibili à l'insetticidi. A mortalità media (± SE) di e zanzare catturate in natura 24 ore dopu à l'abbattimentu è l'esposizione era rispettivamente di 99,47 ± 0,52% è 98,93 ± 0,65%, è a mortalità media di a discendenza F1 era rispettivamente di 98,89 ± 1,11% è 98,33 ± 1,11% (Tavule 2, 3).
I risultati di questu studiu indicanu chì i sabbiadori à zampe d'argentu ponu sviluppà resistenza à u piretroide sinteticu (SP) α-cipermetrina in i paesi induve u piretroide (SP) α-cipermetrina hè statu utilizatu rutinariamente. In cuntrastu, i sabbiadori à zampe d'argentu raccolti da i paesi micca cuparti da u prugramma IRS/di cuntrollu sò stati trovati assai suscettibili. U monitoraghju di a suscettibilità di e pupulazioni di sabbiadori salvatichi hè impurtante per monitorà l'efficacità di l'insetticidi utilizati, postu chì sta infurmazione pò aiutà à gestisce a resistenza à l'insetticidi. Alti livelli di resistenza à u DDT sò stati segnalati regularmente in i sabbiadori di e zone endemiche di u Bihar per via di a pressione di selezzione storica da l'IRS chì usa questu insetticida [1].
Avemu trovu chì P. argentipes hè assai sensibile à i piretroidi, è e prove di campu in India, Bangladesh è Nepal anu dimustratu chì l'IRS avia una alta efficacia entomologica quandu hè adupratu in cumbinazione cù cipermetrina o deltametrina [19, 26, 27, 28, 29]. Recentemente, Roy et al. [18] anu signalatu chì P. argentipes avia sviluppatu resistenza à i piretroidi in Nepal. U nostru studiu di suscettibilità di campu hà dimustratu chì i moscerini di sabbia à zampe argentate raccolti da i paesi micca esposti à l'IRS eranu assai suscettibili, ma e moscerini raccolti da i paesi IRS intermittenti/ex è IRS cuntinui (a mortalità variava da 90% à 97%, eccettu per i moscerini di sabbia di Anandpur-Haruni chì avianu una mortalità di 89,34% à 24 ore dopu l'esposizione) eranu probabilmente resistenti à a cipermetrina altamente efficace [25]. Una pussibile ragione per u sviluppu di sta resistenza hè a pressione esercitata da a spruzzatura di rutina in interni (IRS) è i prugrammi lucali di spruzzatura basati nantu à i casi, chì sò procedure standard per a gestione di l'epidemie di kala-azar in zone/blocchi/villaggi endemici (Procedura Operativa Standard per l'Investigazione è a Gestione di l'Epidemie [30]. I risultati di stu studiu furniscenu indicazioni precoci di u sviluppu di a pressione selettiva contr'à a cipermetrina altamente efficace. Sfurtunatamente, i dati storichi di suscettibilità per sta regione, ottenuti cù u biotest di buttiglia CDC, ùn sò micca dispunibili per paragone; tutti i studii precedenti anu monitoratu a suscettibilità à P. argentipes utilizendu carta impregnata d'insetticida OMS. E dosi diagnostiche d'insetticidi in e strisce di prova di l'OMS sò e concentrazioni d'identificazione raccomandate d'insetticidi per l'usu contr'à i vettori di a malaria (Anopheles gambiae), è l'applicabilità operativa di queste concentrazioni à i pappataci ùn hè chjara perchè i pappataci volanu menu frequentemente chè e zanzare, è passanu più tempu in cuntattu cù u sustratu in u biotest [23].
I piretroidi sintetici sò stati aduprati in e zone endemiche di VL di u Nepal dapoi u 1992, alternendu cù i SP alfa-cipermetrina è lambda-cialotrina per u cuntrollu di i pappataci [31], è a deltametrina hè stata ancu aduprata in Bangladesh dapoi u 2012 [32]. A resistenza fenotipica hè stata rilevata in pupulazioni salvatiche di pappataci à zampe argentate in zone induve i piretroidi sintetici sò stati aduprati per un bellu pezzu [18, 33, 34]. Una mutazione non sinonima (L1014F) hè stata rilevata in pupulazioni salvatiche di u pappataci indianu è hè stata assuciata à a resistenza à u DDT, ciò chì suggerisce chì a resistenza à i piretroidi nasce à u livellu moleculare, postu chì sia u DDT sia u piretroide (alfa-cipermetrina) miranu à u listessu genu in u sistema nervosu di l'insetti [17, 34]. Dunque, a valutazione sistematica di a suscettibilità à a cipermetrina è u monitoraghju di a resistenza à e zanzare sò essenziali durante i periodi di eradicazione è di post-eradicazione.
Una limitazione putenziale di questu studiu hè chì avemu utilizatu u biotest in fiala CDC per misurà a suscettibilità, ma tutte e paragune anu utilizatu risultati di studii precedenti chì utilizavanu u kit di biotest di l'OMS. I risultati di i dui biotest ùn ponu micca esse direttamente paragunabili perchè u biotest in fiala CDC misura a riduzione à a fine di u periodu di diagnosticu, mentre chì u biotest di u kit di l'OMS misura a mortalità à 24 o 72 ore dopu l'esposizione (quest'ultima per i cumposti à azzione lenta) [35]. Un'altra limitazione putenziale hè u numeru di paesi IRS in questu studiu paragunatu à un paese non IRS è un paese non IRS/ex IRS. Ùn pudemu micca suppone chì u livellu di suscettibilità à i vettori di zanzare osservatu in i paesi individuali in un distrettu sia rappresentativu di u livellu di suscettibilità in altri paesi è distretti in Bihar. Mentre l'India entra in a fase di post-eliminazione di u virus di a leucemia, hè imperativu impedisce u sviluppu significativu di resistenza. Hè necessariu un monitoraghju rapidu di a resistenza in e pupulazioni di pappataci di diversi distretti, blocchi è zone geografiche. I dati presentati in questu studiu sò preliminari è devenu esse verificati per paragone cù e concentrazioni d'identificazione publicate da l'Organizazione Mondiale di a Salute [35] per avè una idea più specifica di u statu di suscettibilità di P. argentipes in queste zone prima di mudificà i prugrammi di cuntrollu di i vettori per mantene basse pupulazioni di pappataci è sustene l'eliminazione di u virus di a leucemia.
A zanzara P. argentipes, u vettore di u virus di a leucosi, pò cumincià à mustrà i primi segni di resistenza à a cipermetrina assai efficace. U monitoraghju regulare di a resistenza à l'insetticidi in e pupulazioni salvatiche di P. argentipes hè necessariu per mantene l'impattu epidemiologicu di l'intervenzioni di cuntrollu di i vettori. A rotazione di l'insetticidi cù diverse modalità d'azione è/o a valutazione è a registrazione di novi insetticidi hè necessaria è raccomandata per gestisce a resistenza à l'insetticidi è sustene l'eliminazione di u virus di a leucosi in India.
Data di publicazione: 17 di ferraghju 2025